Saturs
- Kas ir genotips un fenotips?
- HIV genotipēšanas izskaidrošana
- HIV fenotipēšanas izskaidrošana
- Kad tiek veikts ģenētiskās pretestības tests?
Ja terapija neizdodas, jāizvēlas alternatīvas zāļu kombinācijas, lai nomāktu šo jauno rezistentu vīrusu populāciju. Ģenētiskās pretestības pārbaude palīdz to atvieglot, nosakot rezistento mutāciju veidus cilvēka "vīrusu baseinā", vienlaikus nosakot, cik šie vīrusi ir uzņēmīgi pret iespējamiem pretretrovīrusu līdzekļiem.
HIV ģenētiskās rezistences testēšanai tiek izmantoti divi galvenie instrumenti: HIV genotipiskais tests un HIV fenotipiskais tests.
Kas ir genotips un fenotips?
Pēc definīcijas genotips ir vienkārši organisma ģenētiskais sastāvs, bet fenotips ir šī organisma novērojamās īpašības vai iezīmes.
Genotipiskie testi (vai genotipēšana) darbojas, identificējot iedzimtas instrukcijas šūnas ģenētiskajā kodējumā vai DNS. Fenotipiskie testi (vai fenotipēšana) apstiprina šo instrukciju izpausmi dažādu vides apstākļu ietekmē.
Kaut arī saikne starp genotipu un fenotipu nav absolūta, genotipa noteikšana bieži var paredzēt fenotipu, it īpaši, ja ģenētiskā koda izmaiņas rada paredzamās pazīmju vai īpašību izmaiņas, tāpat kā zāļu rezistences veidošanās gadījumā.
Savukārt fenotipēšana apstiprina "šeit un tagad". Tās mērķis ir novērtēt organisma reakciju uz īpašām izmaiņām vides spiedienā, piemēram, ja HIV tiek pakļauta dažādiem medikamentiem un / vai zāļu koncentrācijai.
HIV genotipēšanas izskaidrošana
HIV genotipu noteikšana parasti ir visizplatītākā tehnoloģija, ko izmanto rezistences testēšanai. Testa mērķis ir noteikt specifiskas ģenētiskas mutācijas gag-pol vīrusa reģions " genomu (vai ģenētiskais kods). Šis ir reģions, kurā DNS ķēdē tiek kodētas reversās transkriptāzes, proteāzes un integrāzes enzīmi - vairākuma pretretrovīrusu zāļu mērķi.
Vispirms pastiprinot HIV genomu, izmantojot polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) tehnoloģiju, laboratorijas tehniķi var secināt (vai "kartēt") vīrusa ģenētiku, izmantojot dažādas mutāciju noteikšanas tehnoloģijas.
Šīs mutācijas (vai mutāciju uzkrāšanos) interpretē tehniķi, kuri analizē saistību starp identificētajām mutācijām un vīrusa paredzamo uzņēmību pret dažādiem pretretrovīrusu medikamentiem. Tiešsaistes datu bāzes var palīdzēt, salīdzinot testa secību ar "savvaļas tipa" vīrusa prototipu (t.i., HIV, kurā nav rezistentu mutāciju).
Šo testu interpretāciju izmanto, lai noteiktu uzņēmību pret zālēm, jo lielāks skaits galveno mutāciju piešķir augstāku zāļu rezistences līmeni.
HIV fenotipēšanas izskaidrošana
HIV fenotipu noteikšana novērtē cilvēka HIV pieaugumu zāļu klātbūtnē, pēc tam salīdzina to ar kontrolēta, savvaļas tipa vīrusa augšanu tajā pašā narkotikā.
Tāpat kā genotipisko testu gadījumā, fenotipiskie testi pastiprina HIV genoma gag-pol reģionu. Šī ģenētiskā koda sadaļa pēc tam tiek "uzpotēta" uz savvaļas tipa klonu, izmantojot rekombinantā DNS tehnoloģija. Iegūto rekombinanto vīrusu izmanto zīdītāju šūnu inficēšanai in vitro (laboratorijā).
Pēc tam vīrusu paraugs tiek pakļauts pieaugošai dažādu pretretrovīrusu zāļu koncentrācijai, līdz tiek sasniegta 50% un 90% vīrusa nomākšana. Pēc tam koncentrācijas salīdzina ar savvaļas tipa kontroles parauga rezultātiem.
Relatīvās "reizes" izmaiņas nodrošina vērtību diapazonu, pēc kura nosaka uzņēmību pret zālēm. Četrkārtīgas izmaiņas vienkārši nozīmē, ka, lai panāktu vīrusu nomākšanu, bija nepieciešams četrreiz lielāks zāļu daudzums nekā savvaļas tipa. Jo lielāka reizes vērtība, jo mazāk vīruss ir uzņēmīgs pret konkrētu medikamentu.
Pēc tam šīs vērtības tiek ievietotas zemākajos klīniskajos un augšējos klīniskajos diapazonos, un augšējās vērtības piešķir augstāku zāļu rezistences līmeni.
Kad tiek veikts ģenētiskās pretestības tests?
ASV ģenētiskās rezistences testēšana tradicionāli tiek veikta pacientiem, kuri iepriekš nav ārstēti, lai noteiktu, vai viņiem ir kāda “iegūta” zāļu rezistence. Pētījumi ASV liecina, ka no 6% līdz 16% pārnēsāto vīrusu būs izturīgi vismaz pret vienu pretretrovīrusu līdzekli, savukārt gandrīz 5% būs izturīgi pret vairāk nekā vienu zāļu kategoriju.
Ģenētiskās rezistences testēšana tiek izmantota arī tad, ja ir aizdomas par zāļu rezistenci personām, kuras ārstējas. Pārbaude tiek veikta, kamēr pacients lieto neveiksmīgo režīmu, vai četru nedēļu laikā pēc ārstēšanas pārtraukšanas, ja vīrusu slodze pārsniedz 500 kopijas / ml. Šajos gadījumos parasti dod priekšroku genotipa testēšanai, jo tie maksā lētāk, tiem ir ātrāks laiks un tie piedāvā lielāku jutību savvaļas un rezistentu vīrusu maisījumu noteikšanai.
Personām ar sarežģītu rezistenci pret vairākām zālēm parasti dod priekšroku fenotipisko un genotipisko testu kombinācijai, īpaši tiem, kas pakļauti proteāzes inhibitoru iedarbībai.